SC∕T 7219.5-2015 三代虫病诊断规程 第5部分：细锚三代虫病(水产)
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0.17 |
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9 |
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日期： |
2021-12-23 |
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ICS 65.020.30,B 50 ←:才叫,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7219.5-2015,三代虫病诊断规程,第5 部分:细锚三代虫病,Protocols for diagnosis of GyrodactylosisPart,5: Infection with Gyro彻ctylus sprostonae,2015-02-09 发布2015-05-01 实施,中华人民共和国农业部发布,SCjT 7219.5-2015,目。E,SC/T 7219 ((三代虫病诊断规程》为系列标准:,一→第1 部分:大西洋娃三代虫;,一一第2 部分:皖三代虫病;,一一第3 部分:链兰代虫病;,一→第4 部分:中型三代虫病;,一一第5 部分:细锚三代虫病;,一一第6 部分:小林三代虫病;,本部分为SC/T 7219 的第5 部分,本部分按照GB/T 1. 1-2009 给出的规则起草,请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任,本部分由农业部渔业渔政管理局提出o,本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC 156) 归口,本部分起草单位:中国科学院水生生物研究所、全国水产技术推广总站,本部分主要起草人:李文祥、王桂堂、邹红、吴山功、陈爱平,I,1 范围,三代虫病诊断规程,第5 部分:细锚三代虫病,SC/T 7219.5一2015,本部分规定了细锚兰代虫病的感染对象与临床症状，细锚三二.代虫(也叫史若兰兰代虫， Gyrodacty,lus sρrostonae) 的采集与固定、形态学鉴定和分子检测的方法以及细锚兰代虫病的综合判定,本部分适用于鲤、蝉的细锚三代虫病的流行病学调查、诊断、监测和检疫,2 规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注目期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件,GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法,SCjT 7103 水生动物产地检疫采样技术规范,3 试剂和材料,3. 1 水=符合GBjT 6682 中一级水的规格,3.2 乙醇:分析纯,3. 3 Taq 酶:一20 0C 保存，避免反复冻融,3. 4 dNTPs: 含dATP 、dTTP 、dGTP 和dCTP 各10 mmol/ Lo,3. 5 上游引物:5'- TTTCCGTAGGTGAACCT - 3' ,3.6 下游引物:5'- TCCTCCGCTTAGTGATA - 3' ,3. 7 矿物油:不含DNA 酶和RNA 酶,3. 8 DNA marker 2 000: 2 000 bp 、1000 bp 、750 bp 、500 bp 、250 bp 、100 bp ,3.9 其他试剂见附录Ao,4 仪器和设备,4. 1 解剖盘、剪刀、慑子、解剖针、于术刀,4. 2 体视显微镜和带测微标尺的光学显微镜,4. 3 盖玻片、载玻片、培养皿,4.4 电子天平,4. 5 普通台式离心机和高速冷冻离心机,4.6 普通冰箱和超低温冰箱,4. 7 微量移液器,4.8 PCR 扩增仪,4. 9 离心管和PCR 管,4. 10 紫外透射仪,4.11 水平电泳系统,1,SC/T 7219.5-2015,5 感染对象与临床症状,5. 1 感染对象,细锚三代虫能感染挪CCara川us auratus ω uratus) 、东北鲤CCyρ nnus car户io hematopterus) 、翘嘴,红鲍(Erythroωlter ilishaeformis) 和馀(Silurus spp. )等,5. 2 临床症状,细锚三代虫主要寄生于体表，病鱼常出现蹭擦池壁、跃出水面的行为;有些病鱼反应迟饨，常在水流,缓慢的地方出现，体表因素占液增多变成淡灰色，背鳝、尾鳝和胸鳝的边缘出现廉烂,6 三代虫采集与固定,6. 1 病鱼采集,仔细观察待检鱼类的临床症状和行为，捞取具有典型症状的鱼类。采样方法、样品数量、样品封存,和运输应符合SC/T 7103 的规定,6. 2 三代虫样品的收集,6.2. 1 现场采集,剪取鳝条、鲤、丝或刮取部分体表教液，置于载玻片上。滴加数滴清水，置于体视显微镜下观察。用,解剖针将三代虫从鳝条或螺丝或体表教液中分离，用吸管吸出，放在盛有清水的培养皿中，每尾病鱼至,少采集成虫10 条,6.2.2 固定病鱼中的采集,剪取病鱼鳝条或鲍丝放在载玻片上，逐滴加入自来水浸泡10min ，置于体视显微镜下观察。发现兰,代虫后，用解剖针将虫体分离，放在盛有清水的培养皿中;同时，镜检固定病鱼所用容器底部的沉淀物,如发现有从鱼体脱藩的三代虫，用吸管吸出，放在盛有清水的培养皿中,6. 3 三代虫样晶的固定与保存,加一滴清水到载玻片上，用吸管吸取一个虫体置于水滴中，轻轻地盖上盖玻片。用一张滤纸在盖玻,片边缘缓慢吸水，直到水基本吸干为止。加上-滴APG 恪液(见附录A. 1) 到盖玻片边缘，直到浸满盖,玻片与载玻片之间的空隙o,用于形态学鉴定的虫体样本可用70%酒精保存，用于PCR 鉴定的虫体样品可用95%酒精保存,7 细锚三代虫的鉴定,7. 1 细锚三代虫的形态学鉴定,细锚兰代虫运动如尺攫;虫体呈长叶形，体长O. 2 mm~O. 5 mm ，体前有2 个头器，无黑色眼点;虫,体后端具几T质的伞状后吸器，其上有1 对锚钩、16 个边缘小钩和1 根腹联结片;锚钩基部较长，与钩,尖几乎等长，腹联结片上窄下宽，突起间长小于腹联结片长，可依次进行鉴定,细锚士气代虫后吸器的锚钩、边缘小钩和腹联结片的形态特征、测量……
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